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1、原理及适用范围 阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii )存在于肠道中,在一定条件下可引起人和动物致病。能引起新生儿脑膜炎、致死性小肠结肠炎和菌血症等疾病,且伴随有严重的神经系统后遗症、发育障碍等症状,引起的死亡率高达50%以上。新生儿阪崎肠杆菌感染与婴儿配方奶粉密切相关,奶粉中微量的阪崎肠杆菌污染也能导致感染的发生。 阪崎肠杆菌测试片(FilmplateTMEnterobacter sakazaiiBQ208)是一种预先制备好的一次性培养基产品,由阪崎肠杆菌选择性培养基、吸水凝胶和特异性酶显色剂等组成,简化了检测程序,更加适合各级检验部门和食品生产企业使用。本产品适用于奶粉、牛奶及奶制品的快速检测。参照标准:食品安全国家标准 食品微生物检验坂崎肠杆菌检验(GB 4789.40)。
2、操作方法 2.1、样品处理:取样品100mL(g),加入已预热至44℃装有900mL专用增菌液的锥形瓶中,用手缓缓地摇动至充分溶解,44℃±0.5℃,增菌培养6-8h。 2.2、接种:将阪崎肠杆菌测试片(BQ208)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL经过增菌的样品液,慢慢均匀地滴加到中央滤纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s使培养基凝固,每个样品接种两片。做一片空白阴性对照。 2.3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3、结果判读 对测试片进行观察,呈蓝绿色的菌落为阪崎肠杆菌,为阳性结果;无任何点为阴性结果。出现阳性菌落的样本,最好用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、结果报告 在100mL(或100g )样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
5、附加说明 5.1、经过试验,测试片具有很好的特异性,接种阪崎肠杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点,接种一些肠道菌如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌等时,一加样下去就会出现有紫色的点或晕状,此为产品本身显色剂的原因,不影响产品的使用和结果判读;而金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157和副溶血弧菌等均被抑制。 5.2、多次试验结果阪崎肠杆菌测试片对纯菌的最低检测限为4cfu/mL,与平皿法的符合率均在80%以上。 5.3、专用增菌液的配制和灭菌:取一包专用增菌培养基粉,倒入1000mL的三角锥瓶中,加入900mL纯净水,加塞后加热至沸,保持20分钟,冷却后当天使用。有条件可采用115℃高压灭菌15min。 5.4、注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
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